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LED熒光顯微鏡在結核桿菌檢測中的應用

時間:2018-12-27

目前,全球的結核病( tuberculosis,TB)負擔仍很重。中國疾病預防控制中心2010年全國結核病流行病學抽樣調查資料顯示,我國結核病年發病例約為100萬,年死亡病例5.4萬,其中每年新發耐多藥結核( multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB)患者約10萬例。結核病疫情亟需有效的診斷和治療手段。長久以來,結核病診斷一直依賴傳統的結核分枝桿菌抗酸染色涂片和培養技術,但痰涂片的靈敏度較差,且存在標本獲取的問題;培養所需時間較長,不能滿足快速診斷的需要。隨后,以細胞免疫為基礎的結核分枝桿菌γ干擾素釋放試驗(interferon γ release assay,IGRA)獲得了飛速發展和廣泛應用。該項技術以T-SPOT. TB和QuantiFERON-TB Gold試劑盒為代表,能區分結核分枝桿菌感染與卡介苗( bacillus  Calmette-Guerin,BCG)接種,特別適用于BCG廣泛接種的地區,但無法區分活動性結核病與潛伏性結核感染。不久,以結核分枝桿菌特異性核酸擴增技術(nucleic acid amplification technology,NAAT)為代表的分子診斷技術獲得了較快發展。目前,新的結核病診斷技術分成以下幾個方向:①影像學技術及計算機輔助診斷技術;②顯微鏡學診斷技術;③結核分枝桿菌快速培養技術;④活動性結核病和潛伏性結核感染的免疫學診斷技術;⑤分子診斷技術:包括病原體檢測及耐藥檢測。本文總結了近幾年來結核病診斷領域中新的診斷技術,其中著重介紹已獲得世界衛生組織(World Health Organization,WHO)推薦或通過初步驗證并正在大規模評估的新技術和新產品。

顯微鏡學診斷技術

顯微鏡下痰標本中結核分枝桿菌檢查是確診肺結核病最特異性的方法。涂片抗酸染色鏡檢快速、簡便,采用苯酚復紅抗酸染色及金胺O-羅丹明等熒光染料涂片鏡檢仍是在臨床標本中檢測結核分枝桿菌的主要依據,被WHO推薦并廣泛使用。熒光顯微鏡檢測在一定程度上提高了檢測結核分枝桿菌的靈敏度,但其對光源的嚴格要求限制了熒光顯微鏡的廣泛應用。近年來,發光二極管( light-emittingdiode,LED)熒光顯微鏡的出現完美結合了LED光源與熒光顯微鏡技術。與傳統的熒光顯微鏡相比,LED熒光顯微鏡光源使用壽命更長,價格更低廉,無需復雜的光路調節和暗室操作。由于LED熒光顯微鏡在結核分枝桿菌檢測方面的優異表現,WHO于2011年推薦LED顯微鏡逐步取代傳統的熒光顯微鏡,并可作為以Ziehl-Neelsen染色為基礎的傳統光學顯微鏡檢測的替代方法。

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