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熒光顯微鏡技術特點與應用領域

時間:2018-11-27

熒光顯微鏡是利用一個高發光效率的點光源,經過濾色系統發出一定波長的光(如紫外光365nm或紫藍光420nm)作為激發光、激發標本內的熒光物質發射出各種不同顏色的熒光后,再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。這樣在強烈的對襯背景下,即使熒光很微弱也易辨認,敏感性高,主要用于細胞結構和功能以及化學成分等的研究。熒光顯微鏡的基本構造是由普通光學顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎上組成的。

熒光顯微鏡的種類:正置式和倒置式。

                         正置式                                                                                   倒置式



熒光顯微鏡光學構造



熒光顯微鏡的應用:

1、觀察標本中的自發熒光物質或以熒光素染色或標記的細胞和結構。

2、標本中的熒光物質在紫外線激發下產生各種顏色的熒光,借以研究該熒光物質在細胞和組織內的分布。組織中的自發性熒光物質如神經細胞和心肌細胞等內的脂褐素呈棕黃色熒光,肝貯脂細胞和視網膜色素上皮細胞內的維生素A呈綠色熒光,某些神經內分泌細胞和神經纖維內的單胺類物質(兒茶酚胺、5-羥色胺、組胺等)在甲醛作用下呈不同顏色的熒光,組織內含有的奎寧、四環素等藥物也呈現一定的熒光。

3、細胞內的某些成分可與熒光素結合而顯熒光,如溴化乙錠與吖啶橙可與DNA綜合,進行細胞內DNA含量測定。

4、熒光顯微鏡更廣泛用于免疫細胞化學研究,即以異硫氰酸或羅丹明等熒光素標記抗體(一抗或二抗),用該標記抗體直接或間接地與細胞內的相應抗原結合,以檢測該抗原的存在與分布。

      

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